Што сабой уяўляе бактэрыялагічнае даследаванне? Па якой схеме яно праводзіцца? Што разумеецца пад тэхнікай бяспекі ў дадзеным выпадку? Якія мэты і этапы бактэрыялагічнага даследавання існуюць?
Агульная інфармацыя
Бактэрыялагічнае даследаванне - гэта навуковы працэс, у рамках якога выяўляюцца бактэрыі і вывучаюцца іх ўласцівасці з мэтай пастаноўкі мікрабіялагічнага дыягназу. Вялікае значэнне тут мае вызначэнне тыпавы або відавы прыналежнасці атрыманага мікраарганізма (маецца на ўвазе чыстая культура). Гэта суправаджаецца вывучэннем біяхімічных і фізіялагічных уласцівасцяў арганізмаў, а таксама схільнасці да токсинообразованию. Для гэтых мэтаў выкарыстоўваюцца рэакцыі преципитации і аглютынацыі. Таксама практыкуецца заражэнне лабараторных жывёл з наступным выяўленнем паталагічных змен.
Праца з доследным матэрыялам
Алгарытм бактэрыялагічнага даследавання прадугледжвае няўхільнае выкананне адмысловай інструкцыі. Так, доследны матэрыял неабходна збіраць у стэрыльны посуд у асептычны умовах. Таксама неабходна паклапаціцца аб тым, каб дастаўка ў лабараторыю ажыццяўлялася як мага хутчэй. Пажаданым з'яўляецца захоўванне проб у холадзе. Методыка бактэрыялагічнага даследавання прадугледжвае шмат магчымых сітуацый. Так, тып аб'екта, ўласцівасці мікраарганізма і характар захворвання прымушаюць часта распрацоўваць індывідуальныя інструкцыі для працы. У працы выкарыстоўваецца вялікая колькасць розных метадаў. Адзін з самых распаўсюджаных - гэта бактэрыяскапія. Але калі бактэрыі нефіксаваны, то выкарыстоўваюць раздушаную або вісучую кроплю. Варта адзначыць, што два апошнія варыянту адрозніваюцца падвышаным узроўнем заразное.
бактэрыяскапія
У дадзеным выпадку выкарыстоўваюцца мазкі. Для іх стварэння трэба кроплю вадкасці, якая даследуецца, размеркаваць па паверхні прадметнага шкла. Затес варта высушыць яе. Для гэтага часта выкарыстоўваюць перасоўванне прэпарата праз полымя, якое атрымліваецца ад газавай гарэлкі. Хоць у якасці альтэрнатывы могуць выкарыстоўваць фіксуюць склады. Каб пазначыць, што з дадзеным прэпаратам падрыхтоўчыя дзеянні праведзены, яго афарбоўваюць. Мэта такой маніпуляцыі - дакладнасць, што вельмі важна, калі праводзіцца мікраскапічнае і бактэрыялагічнае даследаванне. Бо калі паўторна выкарыстоўваць прэпарат для іншай мэты, атрымаецца каша, эфектыўна працаваць з якой будзе вельмі складана.
Чаму бактэрыяскапія так папулярная
Не ў апошнюю чаргу гэта абумоўлена даступнасцю дадзенага метаду. Калі праводзіцца бактэрыялагічнае даследаванне свежага прэпарата, то для вызначэння патогены могуць выкарыстоўвацца микрохимические рэакцыі або выбарчая афарбоўка розных структурных частак мікраарганізма. Што з іх лепш? Больш дакладны вынік можна атрымаць пры працы з афарбаваным прэпаратам. У гэтым выпадку доследны матэрыял наносяць на загадзя падрыхтаванае прадметна шкло. Прычым абавязкова тонкім (а пры магчымасці і роўным) пластом. Пасля гэтага неабходна пачакаць, пакуль прэпарат высахне на паветры. Затым мікраарганізмы фіксуюць з дапамогай аднаго з агульнапрынятых метадаў. Пасля гэтага астуджаны прэпарат падвяргаюць афарбоўванню дыферэнцыяльнай або просты фарбай. Для гэтага могуць выкарыстоўвацца сухія і натыўнымі прэпараты. Пасля гэтага застаецца накіраваць на месца навалы арганізмаў ультрафіялетавыя або кароткія сінія прамяні, што выклікае свячэнне усяго мікроба або асобных участкаў яго цела.
Практычнае прымяненне бактэрыяскапіі
Яна выкарыстоўваецца для таго, каб дыягнаставаць шэраг інфекцыйных захворванняў. Самымі вядомымі з іх з'яўляюцца сухоты, ганарэя і зваротны тыф. Акрамя гэтага, да даследавання звяртаюцца, каб вывучаць ўвесь комплекс мікрафлоры органа або прадукту. Але крытыкі часта паказваюць на адносную ненадзейнасць і недакладнасць дадзенага метаду.
Пасевы і перасеву бактэрыяльных культур
Ажыццяўляюць іх з выкарыстаннем пастераўская піпеткі. Правядзенне бактэрыялагічнай і цыталагічныя даследаванні часта бывае складана ажыццявіць без пасеву і перасеву падчас рабочага працэсу. Калі праца вядзецца з пастераўская піпеткай, то яе кончык абломваецца з дапамогай пінцэта. Сам інструмент пасля гэтага праносяць праз полымя гарэлкі і пасля гэтага даюць яму астыць. Дарэчы, пры пасевах могуць выкарыстоўвацца як вадкія, так і цвёрдыя пажыўныя асяроддзя. Ўплыў на выбар аказвае тое, якія мэты бактэрыялагічнага даследавання праследуюцца. Пры гэтым неабходна прытрымлівацца алгарытму працы і тэхнікі бяспекі. Так, пры працы з вадкай пажыўнай асяроддзем неабходна сачыць, каб яна не вылілася і ня намачыла краю коркі і прабірак. Калі даследаванне вядзецца з цвёрдым матэрыялам, то часта выкарыстоўваюць адмысловую іголку для занясення культуры. Калі праводзяцца пасевы і перасеву, яны павінны ажыццяўляцца каля полымя газавай гарэлкі. Для чысціні эксперыменту прабірка не павiнна доўга заставацца адкрытай. Наконт інструмента з культурай: варта прасачыць, каб ён ні да чаго не датыкаўся. Таксама тэхніка бактэрыялагічнага даследавання прадугледжвае прапал краёў прабіркі перад яе закрыццём. Ужо гатовы прэпарат варта адразу ж пасля вырабу падпісаць, каб пазбегнуць у будучыні блытаніны.
выніковасць пасеву
Лічыцца, што гэты метад дазваляе атрымліваць больш дакладныя і надзейныя дадзеныя падчас бактэрыялагічнай дыягностыкі, чым разгледжаная раней бактэрыяскапія. У гэтым выпадку алгарытм дзеянняў такі:
- Першапачаткова чыстую культуру размазваюць па паверхні пажыўнага асяроддзя, якая наліта ў кубак Петры.
- Першапачатковы пасеў неабходна праводзіць ва ўмовах, якія з'яўляюцца спрыяльнымі для дадзенага выгляду мікраарганізмаў.
- Праз суткі-другія пры наяўнасці аптымальнай асяроддзя ўсё прыдатныя калоніі перасяляюцца туды, дзе яны змогуць па максімуму развівацца. Гэта вызваляе іх, такім чынам, ад старонняй мікрафлоры.
Канчатковы вынік - гэта культура аднародных бактэрый, якія можна ідэнтыфікаваць.
чыстыя культуры
А вось як яны атрымліваюцца? Для гэтага выкарыстоўваюцца біялагічныя і механічныя метады. У першым выпадку вялікую ролю гуляюць пажыўныя асяроддзя, дзе ёсць неабходныя ўмовы, спрыяльныя для развіцця пэўнай культуры. Таксама можа выкарыстоўвацца падыход, калі заражаюцца лабараторныя жывёлы, адчувальныя да пэўнага ўвазе бактэрый. Механічныя метады грунтуюцца на выкарыстанні стэрыльнага інструмента, з дапамогай якога культура змяшчаецца ў пажыўнае асяроддзе, якая знаходзіцца ў першай, другой і трэцяй кубках Петры. Потым неабходна пачакаць, пакуль вырастуць асобныя калоніі, і з іх ужо будзе вылучацца чыстая культура. Таксама вырошчвацца бактэрыі могуць у спецыяльных тэрмастата, дзе падтрымліваецца тэмпература пэўнага ўзроўню (звычайна каля 37 градусаў). У такім выпадку працэс працягваецца каля сутак. Але, у залежнасці ад выгляду мікраарганізмаў, могуць ўсталёўвацца і іншыя тэрміны. Таксама немалаважным з'яўляецца наяўнасць неабходнай канцэнтрацыі кіслароду. Для гэтага выкарыстоўваюць розныя метады аэрацыі. Да гэтага часу мы гаварылі пра сітуацыю ў цэлым і агульным, а цяпер давайце засяродзім сваю ўвагу на тым, што сабой уяўляе схема бактэрыялагічнага даследавання.
практыка
Комплекс метадаў часта выкарыстоўваецца для таго, каб выяўляць патагенныя мікраарганізмы ў целе хворага або патэнцыйнага носьбіта. Якія выкарыстоўваюцца матэрыялы і метады залежаць ад таго, якія мэты перасьледуе аналіз, а таксама ад ўмовы асяроддзя, у якой вядзецца праца. На практыцы часцей за ўсё бактэрыі выяўляюцца дзякуючы правядзенню пасеву крыві, узятай у чалавека або жывёлы. Калі добра выяўленыя мясцовыя паразы, патогены можна шукаць у праблемных месцах. Гэта характэрна для такіх хвароб, як дызентэрыя, ганарэя, дыфтэрыя, і шэрагу ім падобных. У адмыслова цяжкіх выпадках гэты працэс разбіваецца на асобныя этапы бактэрыялагічнага даследавання (што характэрна для брушнога тыфа). На кожным з іх выкарыстоўваюцца свае метады, якія накіраваны на пошук прычыны заражэння. Давайце больш дэталёва разгледзім сітуацыю з брушным тыфам. На першым тыдні захворвання найбольш верагодным спосабам дыягнаставання хваробы з'яўляецца пасеў крыві. На другі такім лічыцца сералагічныя даследаванне. На трэцяй тыдня даследуюць спаражнення. Апошнім метадам лічыцца праверка Рэканвалесцэнты.
ідэнтыфікацыя мікраарганізма
Яна пачынаецца з працэсу яго афарбоўвання. Затым глядзяць, як бактэрыя можа расшчапляць вугляводы, амінакіслоты і гэтак далей. Дадаткова гэты працэс можа быць дапоўнены вывучэннем іншых уласцівасцяў, якімі валодае кожны асобны род або від мікраарганізмаў. У якасці прыкладу варта прывесці магчымасці растварэння эрытрацытаў розных жывёл, уплыў на згусальнасць плазмы крыві і растварэнне згустку фібрына і гэтак далей. Усё гэта з'яўляецца дыферэнцыяльнымі прыкметамі асобных прадстаўнікоў мікрасвету. Таксама для канчатковага распазнавання можа выкарыстоўвацца сералагічныя ідэнтыфікацыя (але гэта, як правіла, тычыцца патагенных бактэрый, што належаць да сямейства кішачных).
заключэнне
Варта адзначыць, што шэраг мікраарганізмаў немагчыма ідэнтыфікаваць апісанымі ў артыкуле спосабамі. У такім выпадку шырока выкарыстоўваецца практыка заражэння лабараторных жывёл. Разлік робіцца на тое, што выявіцца характэрная таксігенным або патагенны, якая не назіраецца ў штучных умовах. Таксама заражэнне можа быць выкарыстана ў якасці метаду назапашвання патагенных мікробаў. І ўжо калі супастаўленыя характарыстыкі доследнай культуры, выяўленыя ў працэсе вывучэння біялагічных, марфалагічных, сералагічныя і біяхімічных уласцівасцяў, можна казаць пра тое, што вядома, з якім выглядам мікробаў мы маем справу. Пад ідэнтыфікацыяй маюць на ўвазе ўказанне роду, віду і тыпу бактэрыі. Калі доследны мікраарганізм адхіляецца ў пэўных уласцівасцях ад сваёй тыповай характарыстыкі, то гэта варта абавязкова пазначыць. Шэраг спецыялістаў лічыць, што ў такіх выпадках карысным будзе правядзенне паўторнай ідэнтыфікацыі з дубляваннем ўсіх выкарыстоўваных метадаў і прыёмаў. Часам даследаванні могуць быць перанесены на новы ўзровень, які мае на ўвазе больш сур'ёзны падыход (і больш дарагі). Калі былі атрыманы адмоўныя вынікі, то гэта гаворыць пра тое, што ў прэпараце мікраарганізмы адсутнічалі або яны былі нежыццяздольныя. Але для дакладнасці даследаванняў пры падазрэнні на шэраг бациллоносителей (дызентэрыя, дыфтэрыя, брушны тыф) у такіх выпадках паказаны паўторныя праверкі. Гэта трэба для таго, каб спецыялісты мелі дакладнае ўяўленне пра тое, з чым даводзіцца мець справу.