Аналіз ПЦР: што гэта такое? Як правільна здаваць аналіз ПЦР

Не так даўно быў распрацаваны надзейны, высокаадчувальны і хуткі метад дыягностыкі розных інфекцыйных захворванняў чалавека. Такі спосаб мае назву «аналіз ПЦР». Што гэта такое, у чым яго сутнасць, якія ён можа выявіць мікраарганізмы і як правільна яго здаваць, мы раскажам у нашай артыкуле.

Гісторыя адкрыцця

Вынайшаў спосаб палімеразнай ланцуговай рэакцыі (ПЦР) амерыканскі навуковец Кэры Мюллис у 1983 г. Першапачаткова запатэнтаваны метад дыягностыкі кампаніяй "Цетус Карпарэйшн", у якой і працаваў яго стваральнік. Але ў 1992 г. усе правы і патэнты былі прададзеныя кампаніі "Хофман-Ля Рош". Пасля чаго аказалася, што паралельна падобныя даследаванні праводзіліся і былі зафіксаваныя іншымі амерыканскімі біёлагамі, такімі як Эліс Чэн, Дэвід Эдгар, Джон пошчакі. У 1980 г. займаліся дадзенай праблемай і савецкія навукоўцы А. Слюсаренко, А. Каледзін і С. Гарадзецкі. Таму вызначыць адзінага праваўладальніка аказалася немагчымым. Шматлікія выбітныя біяхімікі ўнеслі пэўны ўклад у распрацоўку методыкі палімеразнай ЦЕРН рэакцыі і запатэнтавалі свае новаўвядзенні. На дадзены момант аналіз метадам ПЦР праводзяць паўсюдна ў спецыяльна абсталяваных лабараторыях.

Сутнасць метаду ПЦР-дыягностыкі

Аналіз ПЦР: што гэта такое і як ён працуе? Сутнасць метаду заключаецца ў тым, каб з дапамогай спецыяльнага фермента ДНК-полимеразы ў штучных умовах павялічыць у аб'ёме пэўную мікробную асяроддзе. Для гэтага шматкроць памнажаюць існуючы ДНК-матэрыял. Такім чынам, пры наяўнасці патагеннага мікраарганізма ва ўзоры яго колькасць будзе павялічана за кошт біяхімічных лабараторных маніпуляцый, і бактэрыю не складзе працы выявіць у мікраскоп.

Як праводзіцца даследаванне матэрыялу?

Для правядзення аналізу патрабуецца:

• ДНК-матрыца;
• праймер, якія злучаюць канцы фрагмента матэрыялу;
• тэрмаўстойлівыя фермент ДНК-полимеразы;
• хімічныя рэчывы, якія забяспечваюць правільную працу ферментаў;
• буферны раствор, неабходны для стварэння адпаведных умоў для росту і развіцця ДНК-матэрыялу.

Для выканання ПЦР выконваюць 25-30 паўтораў, якія складаюцца з трох стадый: дэнатурацыя, адпалу і элангацыях.

Для аналізу полимезарной ланцуговай рэакцыі выкарыстоўваюць спецыяльны прыбор - амплификатор. Сучаснае абсталяванне дазваляе ўсталёўваць неабходную праграму награвання і ахаладжэння прабірак для ліквідацыі памылак падчас правядзення дыягностыкі.

Дзе ўжываюць дыягностыку?

Метад полимезарной ланцуговай рэакцыі выкарыстоўваюць у розных галінах медыцыны:

• крыміналісты з яго дапамогай ідэнтыфікуюць генетычны матэрыял, напрыклад валасы, сліну або кроў;
• аналіз крыві ПЦР дапамагае пры генотипировании, напрыклад для выяўлення індывідуальнай генетычна закладзенай рэакцыі на пэўны лекавы прэпарат;
• з дапамогай такога метаду усталёўваюць наяўнасць роднасных сувязяў паміж людзьмі;
• самым запатрабаваным ПЦР-метад стаў у медыцынскай дыягностыцы для вызначэння розных інфекцыйных захворванняў.

Якія інфекцыі выяўляе ПЦР?

Такім чынам, медыцына даўно і паспяхова выкарыстоўвае аналіз ПЦР. Што гэта такое, мы ўжо даведаліся. А якіх узбуджальнікаў можна выявіць з яго дапамогай? Метадам ПЦР дыягнастуюцца наступныя інфекцыйныя захворванні :

• гепатыты А, У, З;
• уреаплазмоз;
• кандыдоз;
• хламідіоз;
• мікаплазмоз;
• гарднереллез;
• інфекцыйны монануклеёз;
• трыхаманіяз;
• папілломавірусной інфекцыя;
• сухоты;
• герпесная інфекцыя 1-га і 2-га тыпаў;
• хеликобактериоз;
• цітомегаловірус;
• дыфтэрыя;
• сальманелёз;
• ВІЧ-інфекцыя.

Таксама метады ПЦР выкарыстоўваюцца ў дыягностыцы анказахворванняў.

перавагі метаду

Дыягностыка ПЦР валодае побач пераваг:

1. Высокая адчувальнасць. Нават пры наяўнасці ўсяго некалькіх малекул ДНК мікраарганізма аналіз ПЦР вызначае наяўнасць інфекцыі. Дапаможа метад пры хранічных і латэнтна якія праходзяць захворваннях. Часта ў такіх выпадках мікраарганізм з'яўляецца некультивируемым іншымі спосабамі.
2. Для даследавання падыходзіць любы матэрыял, напрыклад сліна, кроў, палавыя вылучэнні, валасы, клеткі эпітэлія. Найбольш распаўсюджаным з'яўляецца аналіз крыві і урогенітального мазка на ПЦР.

3. Не патрабуецца працяглага вырошчвання культур. Аўтаматызаваны працэс правядзення дыягностыкі дазваляе атрымаць вынікі даследавання праз 4-5 гадзін.
4. Метад з'яўляецца амаль цалкам пэўным. Зафіксаваныя толькі адзінкавыя выпадкі ложноотріцательные выніку.
5. Магчымасць вызначыць некалькі відаў узбуджальнікаў з адной пробы матэрыялу. Гэта не толькі паскарае працэс дыягностыкі захворвання, але і істотна зніжае матэрыяльныя выдаткі. Часта лекар прызначае комплексны аналіз ПЦР. Кошт абследавання, які складаецца з вызначэння шасці узбуджальнікаў, складае каля 1500 рублёў.

Рэкамендацыі па падрыхтоўцы да аналізу

Каб вынікі былі дакладнымі пры правядзенні даследавання ПЦР, здаць аналіз трэба, выконваючы рэкамендацыі па папярэдняй падрыхтоўцы да дыягностыкі:

1. Перад здачай сліны варта ўстрымацца ад прыёму ежы і лекаў за 4 гадзіны да плота матэрыялу. Непасрэдна перад працэдурай прапалашчыце рот кіпячонай вадой.
2. Вышэйазначанымі правіламі трэба кіравацца і пры ўзяцці ўзору з унутранай паверхні шчокі. Пасля паласкання рэкамендуюць правесці лёгкі масаж скуры для вылучэння сакрэту залозы.
3. Мачу звычайна збіраюць у хатніх умовах. Для гэтага трэба правесці пільны туалет палавых органаў. У стэрыльны пластыкавы кантэйнер неабходна сабраць 50-60 мл мачы. Для забеспячэння чысціні матэрыялу рэкамендуецца жанчынам ўставіць тампон у похве, а мужчынам максімальна адцягнуць скурную зморшчыну. Нельга здаваць матэрыял у перыяд менструальных вылучэнняў.
4. Для здачы спермы трэба ўстрымацца ад палавога акту на працягу 3 дзён да плота матэрыялу. Таксама лекары раяць адмовіцца ад наведвання сауны і прыняцця гарачай ванны, ўжывання алкаголю і вострай ежы. За 3 гадзіны да аналізу трэба ўстрымацца ад мачавыпускання.
5. Для здачы урогенітального мазка, напрыклад калі праводзіцца аналіз на хламідіі ПЦР, як жанчынам, так і мужчынам рэкамендуецца палавой спакой на працягу 3 дзён. За 2 тыдні да аналізу нельга прымаць антыбактэрыйныя прэпараты. За тыдзень трэба спыніць выкарыстанне інтымных геляў, мазяў, похвавых свечак, спрынцаванне. За 3 гадзіны да даследавання трэба ўстрымацца ад мачавыпускання. Падчас менструацый плот матэрыялу не праводзіцца, толькі праз 3 дні пасля спынення крывяных вылучэнняў можна ўзяць урогенітальный мазок.

ПЦР падчас цяжарнасці

У перыяд чакання маляняці многія інфекцыйныя захворванні, якія перадаюцца палавым шляхам, з'яўляюцца вельмі небяспечнымі для нармальнага развіцця плёну. ЗППП могуць справакаваць ўнутрычэраўна затрымку развіцця, выкідак ці заўчасныя роды, прыроджаныя заганы дзіцяці. Таму вельмі важна прайсці на ранніх тэрмінах цяжарнасці абследаванне метадам ПЦР. Здаць аналіз неабходна пры пастаноўцы на ўлік - да 12 тыдняў.

Плот матэрыялу адбываецца з канала шыйкі маткі з дапамогай адмысловай шчотачкі. Працэдура бязбольная і не ўяўляе небяспекі для малога. Звычайна падчас цяжарнасці праводзяць аналіз на хламідіі ПЦР-метадам, а таксама на уреаплазмоз, мікаплазмоз, цітомегаловірус, герпес, папилломавирус. Такі комплекс абследавання называюць ПЦР-6.

ПЦР для дыягностыкі ВІЧ

У сувязі з тым, што метад палімеразнай ланцуговай рэакцыі вельмі адчувальны да зменаў у арганізме і умовам правядзення дыягностыкі, многія фактары могуць паўплываць на вынік. Таму аналіз ПЦР на ВІЧ-інфекцыю не з'яўляецца пэўным метадам, яго эфектыўнасць - 96-98%. У астатніх 2-4% выпадкаў тэст дае прытворнададатныя вынікі.

Але ў некаторых сітуацыях без ПЦР-дыягностыкі ВІЧ не абысціся. Звычайна яе праводзяць людзям з ложноотріцательные вынікам ІФА. Такія паказчыкі сведчаць аб тым, што ў чалавека яшчэ не выпрацаваліся антыцелы да віруса і іх немагчыма выявіць без шматразовага павелічэння колькасці. Менавіта гэтага можна дасягнуць, правёўшы аналіз крыві ПЦР-метадам.

Таксама неабходна такая дыягностыка дзецям першага года жыцця, народжаным ад ВІЧ-пазітыўнай маці. Метад з'яўляецца адзіным спосабам дакладнага вызначэння статусу дзіцяці.

ПЦР для дыягностыкі гепатытаў

Метад палімеразнай ланцуговай рэакцыі дазваляе выявіць ДНК віруса гепатытаў А, У, З задоўга да адукацыі антыцелаў да інфекцыі або з'яўлення сімптомаў хваробы. Асабліва эфектыўным з'яўляецца аналіз ПЦР на гепатыт З, так як у 85% выпадкаў такое захворванне працякае бессімптомна і без своечасовага лячэння пераходзіць у хранічную стадыю.

Своечасовае выяўленне ўзбуджальніка дапаможа пазбегнуць ускладненняў і працяглага лячэння.

Комплекснае абследаванне ПЦР

Комплексны аналіз ПЦР: што гэта такое? Гэта абследаванне метадам полимезарной ланцуговай рэакцыі, якое ўключае ў сябе вызначэнне адначасова некалькіх відаў інфекцый: мікоплазмы гениталиум, мікоплазмы хоминис, гарднереллы вагиналис, Кандіда, тріхомонады, цітомегаловіруса, уреаплазмы уреалитикум, герпесу 1-га і 2-га тыпаў, ганарэі, папилломавируса. Кошт такой дыягностыкі вагаецца ад 2000 да 3500 руб. у залежнасці ад клінікі, якія выкарыстоўваюцца матэрыялаў і абсталявання, а таксама ад віду аналізу: якаснага або колькаснага. Які неабходны ў вашым выпадку - вырашыць лекар. У адных выпадках дастаткова толькі проста вызначыць наяўнасць ўзбуджальніка, у іншых, напрыклад пры ВІЧ-інфекцыі, важную ролю адыгрывае колькасны тытр. Пры дыягностыцы ўсіх вышэйпералічаных узбуджальнікаў абследаванне называюць «аналіз ПЦР-12».

Расшыфроўка вынікаў аналізу

Расшыфроўка аналізу ПЦР не ўяўляе складанасці. Ёсць толькі 2 шкалы паказчыка - «станоўчы вынік» і «адмоўны вынік». Пры выяўленні ўзбуджальніка лекары могуць з 99% -й упэўненасцю пацвердзіць наяўнасць захворвання і прыступіць да лячэння пацыента. Пры колькасным метадзе вызначэння інфекцыі ў адпаведнай графе будзе паказаны лікавы паказчык выяўленых бактэрый. Толькі лекар можа вызначыць ступень захворвання і прызначыць неабходнае лячэнне.

У некаторых выпадках, напрыклад пры вызначэнні ВІЧ-інфекцыі метадам ПЦР, пры адмоўным выніку ўзнікае неабходнасць правядзення дадатковых абследаванняў для пацверджання атрыманых паказчыкаў.

Дзе здаць аналіз?

Дзе здаць ПЦР-аналіз: у дзяржаўнай паліклініцы або ў прыватнай лабараторыі? На жаль, у муніцыпальных медыцынскіх установах апаратура і метады нярэдка састарэлыя. Таму лепш аддаць перавагу прыватным лабараторыям з сучасным абсталяваннем і высокакваліфікаванымі кадрамі. Акрамя таго, у прыватнай клініцы вы атрымаеце вынікі значна хутчэй.

У Маскве многія прыватныя лабараторыі прапаноўваюць правядзенне аналізу ПЦР на розныя інфекцыі. Напрыклад, у такіх клініках, як «Віта», «Комплексная клініка», «Шчаслівая сям'я», «УРО-Про», праводзяць аналіз ПЦР. Кошт абследавання складае ад 200 руб. за вызначэнне аднаго ўзбуджальніка.

Можна зрабіць выснову, што дыягностыка інфекцыйных захворванняў метадам ПЦР ў большасці выпадкаў з'яўляецца хуткім і пэўным спосабам выяўлення ўзбуджальніка ў арганізме на ранніх тэрмінах інфікавання. Але ўсё ж у пэўных выпадках варта выбраць іншыя спосабы дыягностыкі. Вызначыць неабходнасць правядзення такога даследавання можа толькі спецыяліст. Расшыфроўка аналізу ПЦР таксама патрабуе прафесійнага падыходу. Выконвайце рэкамендацый урача і ня здавайце самастойна аналізы, у якіх няма неабходнасці.